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細(xì)胞系鑒定錯(cuò)誤的根源

  • 發(fā)布日期:2017-10-27      瀏覽次數(shù):1324
    •    細(xì)胞系鑒定錯(cuò)誤的根源
        大部分的細(xì)胞系在學(xué)術(shù)環(huán)境中被建立,在學(xué)術(shù)環(huán)境下,組織培養(yǎng)通常被認(rèn)為是一種對(duì)技能少有要求的技術(shù),其所用到的必要設(shè)備如流動(dòng)柜和孵育箱使用起來沒什么限制。在這些情況下,嘗試建立一種新的細(xì)胞系通常會(huì)導(dǎo)致交叉污染是不足為怪的。在送至德國(guó)的微生物和細(xì)胞培養(yǎng)收藏所的550個(gè)個(gè)白血病和淋巴瘤細(xì)胞系中,59/395(15%)被初創(chuàng)者送來的細(xì)胞系以及23/155(15%)的二級(jí)來源是錯(cuò)誤的。可以推測(cè)大部分二級(jí)來源的細(xì)胞系已被交叉污染或被初創(chuàng)者錯(cuò)誤鑒定。
        有許多緣由可以引起細(xì)胞培養(yǎng)物錯(cuò)誤鑒定,每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室都存在風(fēng)險(xiǎn)。或許細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定zui直接的原因就是在常規(guī)操作過程中對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)容器進(jìn)行了錯(cuò)誤標(biāo)記。造成這種問題出現(xiàn)的原因有:實(shí)驗(yàn)員的工作負(fù)荷、缺乏注意以及在細(xì)胞操作過程中的分心。
        培養(yǎng)物的交叉污染以及隨后污染細(xì)胞的過量生長(zhǎng)是另一個(gè)引起細(xì)胞系錯(cuò)誤鑒定的常見原因。這種情況發(fā)生的幾率在以下條件會(huì)增加:試劑的共用、在再喂養(yǎng)操作時(shí)反復(fù)使用相同的試管、在沒有充分分離每一細(xì)胞類型情況下同時(shí)對(duì)多個(gè)培養(yǎng)物進(jìn)行操作。當(dāng)交叉污染發(fā)生時(shí),一種細(xì)胞類型迅速生長(zhǎng)而超過另一種,在4-5次細(xì)胞傳代后,一個(gè)純的污染細(xì)胞培養(yǎng)物將會(huì)形成。
        在使用其它物種的滋養(yǎng)層(例如小鼠3T3細(xì)胞)來繁殖人類干細(xì)胞或原始細(xì)胞時(shí)有意地共培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致交叉污染或人類細(xì)胞系過生長(zhǎng)。正常情況下,滋養(yǎng)層細(xì)胞處于無增殖狀態(tài),但只要生長(zhǎng)抑制程序不*,它就會(huì)不斷繁殖并逐步取代人類細(xì)胞。體細(xì)胞雜交雖不常見但也會(huì)發(fā)生,如人類套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系NCEB-1就攜帶了小鼠的七條染色體。
        異種移植也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞系交叉污染和錯(cuò)誤鑒定,來自異種移植的復(fù)蘇細(xì)胞會(huì)被宿主動(dòng)物細(xì)胞所替代。
        一般而言,交叉污染zui終的結(jié)果將會(huì)是少量適應(yīng)細(xì)胞*且快速的替代。兩個(gè)細(xì)胞系不能持續(xù)共存于同一個(gè)培養(yǎng)環(huán)境,除非它們是共生關(guān)系,但這種情況據(jù)我們所知還未有報(bào)道。一個(gè)細(xì)胞群經(jīng)過許多次傳代后還能包含一個(gè)穩(wěn)定的混合基因組,*已知的情況是接續(xù)的體細(xì)胞雜交。
        簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的質(zhì)控措施能夠阻止或至少會(huì)減少細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定的發(fā)生。由于缺乏重視及未采用質(zhì)控措施導(dǎo)致細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定現(xiàn)象極其普遍。大量質(zhì)控措施的實(shí)行以及相應(yīng)文件的適當(dāng)調(diào)整被認(rèn)為是生物制藥領(lǐng)域出現(xiàn)相對(duì)較低細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定報(bào)道的因素。
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