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熒光定量PCR檢測技術服務-Taqman探針法

簡要描述:熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應用;實時熒光定量PCR:在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-05-13
  • 訪  問  量:7360

實時熒光定量PCR技術(Real Time Quantitative PCR)

在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

相對定量應用(Relative Quantification,RQ)    

 特異性熒光標記:

 TaqMan法

 TaqMan探針的特性:

(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等

(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)

(3)探針完整,R所發射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發熒光

(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針

相對定量通過內標定量:
內標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數恒定,受環境因素影響小,內標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數量。

相對定量分析方法  :

 2-ΔΔCt
前提:目標序列和內參序列的擴增效率接近100%且偏差在5%以內
  1、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值:
    ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test) 
    ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator) 
  2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:
         ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
  3、計算表達水平比率:
                    2 –ΔΔCT=表達量的比值

服務流程:

步驟

客 戶 提 供

服 務 內 容

基 屹 提 供

1

新鮮的且盡量多的材料;已知的全長基因序列;盡可能詳細的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等。

DNA/RNA提取,根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。

 

2

純化好的DNA/RNA(大于5 ug/樣品);已知的全長基因序列;盡可能詳細的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等。

根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。

 

3

 

以DNA為模板,對目的基因進行熒光定量PCR檢測分析

提供完整的定量分析結果、實驗熒光定量擴增曲線及詳細的實驗步驟。

注意:客戶可根據所能提供的起始材料不同,選擇從步驟1或2啟動項目。

       

 

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