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DNA抽提和純化

簡(jiǎn)要描述:DNA抽提和純化主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-05-13
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       DNA抽提和純化主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有;硅質(zhì)材料、陰離子交換樹(shù)脂等。

  DNA抽提和純化總的原則:
  1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性;
  2、核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子;
  3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類(lèi)分子的污染應(yīng)降低到zui低程度。

  方法介紹:
  一、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
  二、甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
  三、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細(xì)胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DAN沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
  四、異丙醇沉淀法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))
  五、表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
  六、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng)。
  七、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。

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